2 × смесь HotStart Taq PCR Mix

Этот продукт содержит ДНК-полимеразу HotStart Taq, дНТФ, MgCl.2, буфер реакции, усилитель ПЦР, оптимизатор и стабилизатор, с концентрацией 2 ×. Он обладает такими преимуществами, как высокая скорость усиления, простота, высокая чувствительность, высокая специфичность, хорошая стабильность и тому подобное, и может в максимальной степени уменьшить количество ошибок при работе. Он подходит для высокоспецифичных реакций ПЦР и амплификации сложных матриц, таких как высокое содержание GC (> 60%) или матриц со вторичными структурами, а также для крупномасштабного обнаружения генов и т. Д.

Кот. Нет Размер упаковки
4992321 1 мл
4992322 5x1 мл
4992316 5 × 1 мл

Информация о продукте

часто задаваемые вопросы

Теги продукта

Изюминка продукта

Taq MasterMix с одной трубкой (Национальная сертификация высокотехнологичной продукции)

■ 2 × HotStart Taq PCR MasterMix имеет улучшенную специфичность и чувствительность реакции ПЦР и может амплифицировать сложные шаблоны с высоким содержанием GC, вторичной структурой и т.п. Можно усилить всего 2 копии целевого шаблона, что обеспечит более точные экспериментальные результаты.

■ Уникальная формула HotStart Taq MasterMix делает всю реакционную систему очень стабильной, и на ее активность не влияет повторное замораживание-оттаивание или длительное хранение при 4 ℃.

■ Стабильный и эффективный предварительно приготовленный смешанный раствор для ПЦР может сделать операцию быстрой и простой, значительно снизив трудоемкость и количество ошибок при взятии проб. В смесь также включены высокопроизводительный усилитель и оптимизатор ПЦР, что снижает требования к условиям ПЦР.

■ Этот продукт имеет как красители, так и не содержащие красителей системы. Продукты MasterMix, содержащие краситель, можно подвергать прямому электрофорезу после ПЦР без добавления загрузочного буфера.

Все продукты могут быть настроены для ODM / OEM. Подробности см.пожалуйста, нажмите Индивидуальное обслуживание (ODM / OEM)


  • Предыдущий:
  • Следующий:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    В: нет полос усиления

    Шаблон A-1

    ■ Шаблон содержит белковые примеси или ингибиторы Taq и т. Д. - Очистите матрицу ДНК, удалите примеси белка или извлеките матричную ДНК с помощью наборов для очистки.

    ■ Денатурация шаблона не завершена —— Увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    ■ Ухудшение качества шаблона - повторно подготовьте шаблон.

    Праймер А-2

    ■ Низкое качество праймеров - повторно синтезируйте праймер.

    ■ Разрушение грунтовки —— Разбавьте праймеры с высокой концентрацией в небольшом объеме для консервации. Избегайте многократного замораживания и оттаивания или длительного криоконсервации при 4 ° C.

    ■ Неправильный дизайн праймеров (например, длина праймера недостаточная, димер образовался между праймерами и т. Д.) -Изменить дизайн праймеров (избегать образования димера праймера и вторичной структуры)

    А-3 мг2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 Температура отжига

    ■ Высокая температура отжига влияет на связывание праймера и шаблона. —— Уменьшите температуру отжига и оптимизируйте условия с градиентом 2 ° C.

    A-5 Время продления

    ■ Короткое время продления —— Увеличьте время продления.

    Q: ложноположительный

    Явления: отрицательные образцы также показывают полосы целевой последовательности.

    А-1 Загрязнение ПЦР

    ■ Перекрестное загрязнение целевой последовательности или продуктов амплификации - осторожно, не пипетируйте образец, содержащий целевую последовательность в отрицательном образце, и не проливайте их из центрифужной пробирки. Реагенты или оборудование следует автоклавировать для удаления существующих нуклеиновых кислот, а наличие загрязнения следует определять с помощью экспериментов с отрицательным контролем.

    ■ Загрязнение реагентов —— Смажьте реагенты и храните при низкой температуре.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    ■ Неправильный дизайн праймера, и целевая последовательность гомологична нецелевой последовательности. —— Редизайн грунтовок.

    В: неспецифическое усиление

    Явления: Полосы ПЦР-амплификации не соответствуют ожидаемому размеру, большие или маленькие, или иногда встречаются как специфические полосы амплификации, так и неспецифические полосы амплификации.

    Праймер А-1

    ■ Низкая специфичность праймера.

    —— Редизайн грунтовки.

    ■ Слишком высокая концентрация праймера —— Надлежащим образом увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    А-2 мг2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите концентрацию Mg2 +: Оптимизируйте содержание Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-3 Термостабильная полимераза

    ■ Избыточное количество фермента —— Уменьшите количество фермента соответствующим образом с интервалом 0,5 Ед.

    A-4 Температура отжига

    ■ Температура отжига слишком низкая —— Увеличьте температуру отжига или используйте метод двухэтапного отжига.

    Циклы ПЦР A-5

    ■ Слишком много циклов ПЦР —— Уменьшите количество циклов ПЦР.

    В: пятнистые или смазанные полосы

    Праймер А-1—— Низкая специфичность —— Измените дизайн праймера, измените положение и длину праймера, чтобы повысить его специфичность; или выполнить вложенную ПЦР.

    ДНК-матрица A-2

    —— Матрица не чистая —— Очистите матрицу или извлеките ДНК с помощью наборов для очистки.

    А-3 мг2+ концентрация

    ——Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 dNTP

    —— Слишком высокая концентрация dNTP —— Уменьшите концентрацию dNTP соответствующим образом

    A-5 Температура отжига

    —— Слишком низкая температура отжига —— Увеличьте температуру отжига соответствующим образом

    Циклы A-6

    —— Слишком много циклов —— Оптимизируйте номер цикла

    В: Сколько ДНК-матрицы следует добавить в реакционную систему для ПЦР на 50 мкл?
    ytry
    В: Как усилить длинные фрагменты?

    Первый шаг - выбрать подходящую полимеразу. Обычная полимераза Taq не может быть проверена из-за отсутствия 3'-5'-экзонуклеазной активности, а несоответствие значительно снизит эффективность удлинения фрагментов. Следовательно, обычная полимераза Taq не может эффективно амплифицировать целевые фрагменты размером более 5 т.п.н. Полимераза Taq со специальной модификацией или другая высокоточная полимераза должна быть выбрана для повышения эффективности удлинения и удовлетворения потребностей амплификации длинных фрагментов. Кроме того, амплификация длинных фрагментов также требует соответствующей корректировки конструкции праймера, времени денатурации, времени удлинения, pH буфера и т. Д. Обычно праймеры с 18-24 п.н. могут привести к лучшему выходу. Чтобы предотвратить повреждение шаблона, время денатурации при 94 ° C следует сократить до 30 секунд или меньше за цикл, а время повышения температуры до 94 ° C перед амплификацией должно быть менее 1 мин. Более того, установка температуры удлинения около 68 ° C и проектирование времени удлинения в соответствии со скоростью 1 т.п.н. / мин может обеспечить эффективную амплификацию длинных фрагментов.

    В: Как повысить точность амплификации при ПЦР?

    Частоту ошибок при амплификации ПЦР можно снизить, используя различные ДНК-полимеразы с высокой точностью. Среди всех обнаруженных к настоящему времени ДНК-полимераз Taq фермент Pfu имеет самый низкий уровень ошибок и самую высокую точность (см. Прилагаемую таблицу). Помимо выбора ферментов, исследователи могут дополнительно снизить скорость мутаций ПЦР за счет оптимизации условий реакции, включая оптимизацию состава буфера, концентрацию термостабильной полимеразы и оптимизацию количества циклов ПЦР.

    Напишите здесь свое сообщение и отправьте его нам