2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Премикс для быстрой ПЦР с высокой эффективностью и высокой стрессоустойчивостью.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ - это недавно оптимизированный и обновленный готовый к использованию премикс 2 × ПЦР со всеми основными частями реакции ПЦР, кроме матрицы ДНК и праймеров.

Кот. Нет Размер упаковки
4993001 1 мл
4993002 5x1 мл
4992912 20x5x1 мл
4992913 5 × 1 мл
4992920 20 × 5 × 1 мл
4992921 20 × 5 × 1 мл

Информация о продукте

Экспериментальный пример

часто задаваемые вопросы

Теги продукта

Функции

■ Высокая эффективность амплификации: фрагменты ДНК разных размеров (менее 5 т.п.н.) и источников могут быть эффективно амплифицированы.
■ Высокая чувствительность: из геномных матриц можно амплифицировать всего 10 пг целевых фрагментов.
■ Высокая стрессоустойчивость: для шаблонов с высоким содержанием примесей, таких как грубо извлеченный шаблон / бактериальная культура, целевой фрагмент может быть легко амплифицирован. Повторное замораживание и оттаивание не повлияет на активность полимеразы.
■ Удобство применения: реакционная система была приготовлена ​​легко и быстро. Амплифицированный фрагмент содержит 3'-конец dA-выступа, который удобен для клонирования ТА.

Технические характеристики

Тип: ДНК-полимераза Taq
Образец: Очищенный / грубо извлеченный шаблон / бактериальная культура
Шаблон: > 10 пг
Размер фрагмента: <5 кб
Приложения: ПЦР-амплификация фрагментов ДНК, маркировка ДНК, удлинение праймеров, определение последовательности, крупномасштабное обнаружение генов, полуколичественные эксперименты ПЦР, обнаружение следов ДНК и т. Д.

Все продукты могут быть настроены для ODM / OEM. Подробности см.пожалуйста, нажмите Индивидуальное обслуживание (ODM / OEM)


  • Предыдущий:
  • Следующий:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Рис. 1. Шаблоны из разных источников были усилены TIANGEN Taq MasterMix II и обычным Taq Mix от поставщика TR соответственно для определения стрессоустойчивости реагентов. Результаты показывают, что продукты TIANGEN могут амплифицировать целевые фрагменты из сырых геномных матриц и бактериальной культуры, а устойчивость к стрессу лучше, чем у поставщика TR. A: Неочищенная геномная матрица, экстрагированная TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp / DN: грубая экстракция и обнаружение образцов крови человека. Рис: грубая экстракция и обнаружение образцов риса. B: ПЦР колоний. Фрагмент ПЦР составляет 700 п.н.
    M: маркер TIANGEN III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Хорошая универсальность для шаблонов из разных источников и разной длины
    Рис. 2. Фрагменты разных источников и разной длины амплифицированы с помощью TIANGEN. Taq MasterMix II (A) и обычный Taq Сочетание поставщика TK (B), поставщика TR (C), поставщика V (D) и поставщика G (E) соответственно. Результаты показывают, что комплексные характеристики продуктов TIANGEN являются лучшими с точки зрения возможности амплификации, специфичности и универсальности. M: Маркер TIANGEN III1: матрица геномной ДНК сои (120 п.н.);

    2-3: матрица геномной ДНК риса (694 п.н., 2258 п.н.);

    4: матрица геномной ДНК хлопка (200 п.н.);

    5: кишечная палочка матрица геномной ДНК (2298 п.н.);

    6-7: матрица ДНК генома мыши (1 т.п.н., 2 т.п.н.);

    8-10: матрица геномной ДНК крысы (1 т.п.н., 2 т.п.н., 2080 п.о.);

    11-18: ДНК-матрица генома человека (300 п.н., 448 п.н. (GC%: 74,8%), 1100 п.н., 750 п.н.,

    1000 п.н., 1090 п.н. (GC%: 70,4%), 2 т.п.н., 4 т.п.н.)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Высокая чувствительность
    Фигура 3. Различные концентрации фрагментов ДНК крысы и человека были амплифицированы с использованием TIANGEN. Taq MasterMix II (A), обыкновенный Taq Смесь поставщика V (B) и поставщика TK (C), соответственно, для определения чувствительности усиления. Результаты показывают, что продукт TIANGEN может амплифицировать целевой фрагмент из шаблона генома всего на 0,01 нг, и его чувствительность лучше, чем у продуктов от поставщика V и TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 нг, 100 нг, 50 нг, 20 нг, 10 нг, 1 нг, 0,1 нг, 0,01 нг.
    В: нет полос усиления

    Шаблон A-1

    ■ Шаблон содержит белковые примеси или ингибиторы Taq и т. Д. - Очистите матрицу ДНК, удалите примеси белка или извлеките матричную ДНК с помощью наборов для очистки.

    ■ Денатурация шаблона не завершена —— Увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    ■ Ухудшение качества шаблона - повторно подготовьте шаблон.

    Праймер А-2

    ■ Низкое качество праймеров - повторно синтезируйте праймер.

    ■ Разрушение грунтовки —— Разбавьте праймеры с высокой концентрацией в небольшом объеме для консервации. Избегайте многократного замораживания и оттаивания или длительного криоконсервации при 4 ° C.

    ■ Неправильный дизайн праймеров (например, длина праймера недостаточная, димер образовался между праймерами и т. Д.) -Изменить дизайн праймеров (избегать образования димера праймера и вторичной структуры)

    А-3 мг2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 Температура отжига

    ■ Высокая температура отжига влияет на связывание праймера и шаблона. —— Уменьшите температуру отжига и оптимизируйте условия с градиентом 2 ° C.

    A-5 Время продления

    ■ Короткое время продления —— Увеличьте время продления.

    Q: ложноположительный

    Явления: отрицательные образцы также показывают полосы целевой последовательности.

    А-1 Загрязнение ПЦР

    ■ Перекрестное загрязнение целевой последовательности или продуктов амплификации - осторожно, не пипетируйте образец, содержащий целевую последовательность в отрицательном образце, и не проливайте их из центрифужной пробирки. Реагенты или оборудование следует автоклавировать для удаления существующих нуклеиновых кислот, а наличие загрязнения следует определять с помощью экспериментов с отрицательным контролем.

    ■ Загрязнение реагентов —— Смажьте реагенты и храните при низкой температуре.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    ■ Неправильный дизайн праймера, и целевая последовательность гомологична нецелевой последовательности. —— Редизайн грунтовок.

    В: неспецифическое усиление

    Явления: Полосы ПЦР-амплификации не соответствуют ожидаемому размеру, большие или маленькие, или иногда встречаются как специфические полосы амплификации, так и неспецифические полосы амплификации.

    Праймер А-1

    ■ Низкая специфичность праймера.

    —— Редизайн грунтовки.

    ■ Слишком высокая концентрация праймера —— Надлежащим образом увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    А-2 мг2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите концентрацию Mg2 +: Оптимизируйте содержание Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-3 Термостабильная полимераза

    ■ Избыточное количество фермента —— Уменьшите количество фермента соответствующим образом с интервалом 0,5 Ед.

    A-4 Температура отжига

    ■ Температура отжига слишком низкая —— Увеличьте температуру отжига или используйте метод двухэтапного отжига.

    Циклы ПЦР A-5

    ■ Слишком много циклов ПЦР —— Уменьшите количество циклов ПЦР.

    В: пятнистые или смазанные полосы

    Праймер А-1—— Низкая специфичность —— Измените дизайн праймера, измените положение и длину праймера, чтобы повысить его специфичность; или выполнить вложенную ПЦР.

    ДНК-матрица A-2

    —— Матрица не чистая —— Очистите матрицу или извлеките ДНК с помощью наборов для очистки.

    А-3 мг2+ концентрация

    ——Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 dNTP

    —— Слишком высокая концентрация dNTP —— Уменьшите концентрацию dNTP соответствующим образом

    A-5 Температура отжига

    —— Слишком низкая температура отжига —— Увеличьте температуру отжига соответствующим образом

    Циклы A-6

    —— Слишком много циклов —— Оптимизируйте номер цикла

    В: Сколько ДНК-матрицы следует добавить в реакционную систему для ПЦР на 50 мкл?
    ytry
    В: Как усилить длинные фрагменты?

    Первый шаг - выбрать подходящую полимеразу. Обычная полимераза Taq не может быть проверена из-за отсутствия 3'-5'-экзонуклеазной активности, а несоответствие значительно снизит эффективность удлинения фрагментов. Следовательно, обычная полимераза Taq не может эффективно амплифицировать целевые фрагменты размером более 5 т.п.н. Полимераза Taq со специальной модификацией или другая высокоточная полимераза должна быть выбрана для повышения эффективности удлинения и удовлетворения потребностей амплификации длинных фрагментов. Кроме того, амплификация длинных фрагментов также требует соответствующей корректировки конструкции праймера, времени денатурации, времени удлинения, pH буфера и т. Д. Обычно праймеры с 18-24 п.н. могут привести к лучшему выходу. Чтобы предотвратить повреждение шаблона, время денатурации при 94 ° C следует сократить до 30 секунд или меньше за цикл, а время повышения температуры до 94 ° C перед амплификацией должно быть менее 1 мин. Более того, установка температуры удлинения около 68 ° C и проектирование времени удлинения в соответствии со скоростью 1 т.п.н. / мин может обеспечить эффективную амплификацию длинных фрагментов.

    В: Как повысить точность амплификации при ПЦР?

    Частоту ошибок при амплификации ПЦР можно снизить, используя различные ДНК-полимеразы с высокой точностью. Среди всех обнаруженных к настоящему времени ДНК-полимераз Taq фермент Pfu имеет самый низкий уровень ошибок и самую высокую точность (см. Прилагаемую таблицу). Помимо выбора ферментов, исследователи могут дополнительно снизить скорость мутаций ПЦР за счет оптимизации условий реакции, включая оптимизацию состава буфера, концентрацию термостабильной полимеразы и оптимизацию количества циклов ПЦР.

    Напишите здесь свое сообщение и отправьте его нам