2 × смесь Taq Platinum PCR Mix

Сверхчистая термостабильная ДНК-полимераза HotStart с высокой точностью воспроизведения.

ДНК-полимераза Taq Platinum представляет собой химически модифицированную полимеразу HotStart Taq с 3'-5'-экзонуклеазной активностью и 5'-3'-экзонуклеазной активностью. Ферментативная активность ДНК-полимеразы Taq Platinum блокируется при комнатной температуре. Его активность может быть активирована только после нагревания при 94 ° C в течение 5-10 минут, что позволяет избежать неспецифической амплификации, вызванной неспецифическим отжигом праймера или димером праймера при низкой температуре перед начальным циклом реакции ПЦР, и значительно повысить чувствительность. и специфичность реакции ПЦР. Кроме того, ДНК-полимераза Taq Platinum имеет очень высокую точность, которая уступает по качеству полимеразе Pfu. Скорость удлинения полимеризации ДНК выше, чем у полимеразы Pfu, а эффективность амплификации выше.

Кот. Нет Размер упаковки
4992789 5x1 мл
4992790 5 × 1 мл

Информация о продукте

Экспериментальный пример

часто задаваемые вопросы

Теги продукта

Определение деятельности

1 единица (ед.) Taq Platinum ДНК-полимеразная активность определяется как количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дезоксинуклеотидов в нерастворимые в кислоте вещества при 74 ° C в течение 30 минут с использованием активированной ДНК спермы лосося в качестве матрицы / праймера.

Контроль качества

Чистота детекции SDS-PAGE составляет более 99%; Активности экзогенной нуклеазы не обнаружено; Однокопийный ген в геноме человека можно эффективно амплифицировать; Никаких значительных изменений активности при хранении при комнатной температуре в течение одной недели.

Основные технические параметры

Он обладает 5'-3'-экзонуклеазной активностью и 3'-5'-экзонуклеазной активностью, и его точность находится рядом с полимеразой Pfu. Скорость удлинения платиновой полимеразы Taq выше, чем у полимеразы Pfu, а эффективность амплификации выше. Продукты ПЦР можно напрямую лигировать с тупым концом или клонировать вектором ТА. Если необходимо повысить эффективность клонирования, рекомендуется сначала очистить и добавить выступающие части 3'-dA перед клонированием в вектор ТА.

Taq Platinum MasterMix с одной пробиркой (национальная сертификация высокотехнологичной продукции)

■ Taq Platinum MasterMix имеет улучшенную специфичность и чувствительность реакции ПЦР и может амплифицировать сложные шаблоны с высоким содержанием GC, вторичной структурой и т.п. Можно усилить всего 2 копии целевого шаблона, что обеспечит более точные экспериментальные результаты.

■ Уникальная формула Taq Platinum MasterMix делает всю реакционную систему очень стабильной, и ее активность не будет зависеть от повторного замораживания-оттаивания или длительного хранения при 4 ° C.

■ Стабильный и эффективный предварительно приготовленный смешанный раствор для ПЦР может сделать операцию быстрой и простой, значительно снизив трудоемкость и количество ошибок при взятии проб. В смесь также включены высокопроизводительный усилитель и оптимизатор ПЦР, что снижает требования к условиям ПЦР.

■ Этот продукт имеет как красители, так и не содержащие красителей системы. Продукты MasterMix, содержащие краситель, можно подвергать прямому электрофорезу после ПЦР без добавления загрузочного буфера.

Приложения

Он может заменить полимеразу Pfu для амплификации продуктов высокой точности из сложных шаблонов, таких как геномы, и подходит для таких приложений, как клонирование генов экспрессии, сайт-специфические мутации и анализ однонуклеотидного полиморфизма (SNP) и т. Д.

Меры предосторожности при разработке праймеров для ПЦР:

Длина грунтовки обычно 20-25 мер. Однако при проведении ПЦР с длинными фрагментами длина праймера должна быть увеличена до 30-35 мер.

■ Между двумя праймерами нет комплементарных пар, особенно для последних 3 оснований на 3'-конце.

■ Содержание ГХ должно составлять 50–60%, и избегайте местных богатых ГХ или АТ. Для того чтобы праймер и матрица связались стабильно, избегайте богатой АТ структуры на 3'-конце.

■ Избегайте образования вторичной структуры грунтовки.

■ Выберите две грунтовки с близкими друг к другу температурами Tm.

Расчет значения Tm праймеров для ПЦР:

■ Если количество грунтовки меньше 20 мер: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).

■ Когда праймер содержит более 20 мер: Tm = 81,5 + 0,41 × (GC%) - 600 / л, где L - длина праймера.

■ Установите температуру отжига на (Tm-5) ° C.

Ввод праймера для ПЦР

Подходящую конечную концентрацию праймеров можно выбрать между 0,1 мкМ и 1,0 мкМ. Слишком низкая концентрация праймера приводит к низкому выходу продуктов амплификации, а слишком высокая концентрация праймера более склонна к неспецифической амплификации. Обычно, когда количество матричной ДНК велико или в качестве матрицы используется сложная матричная ДНК (например, ДНК генома человека), концентрация праймера должна быть ниже. Когда количество матричной ДНК невелико или в качестве матрицы используется простая матричная ДНК (например, плазмидная ДНК и т. Д.), Концентрация праймера должна быть выше.

Все продукты могут быть настроены для ODM / OEM. Подробности см.пожалуйста, нажмите Индивидуальное обслуживание (ODM / OEM)


  • Предыдущий:
  • Следующий:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Используйте геномную ДНК в качестве матрицы для амплификации фрагмента размером 1 т.п.н. После реакции ПЦР возьмите 5 мкл для обнаружения электрофорезом.
    В: нет полос усиления

    Шаблон A-1

    ■ Шаблон содержит белковые примеси или ингибиторы Taq и т. Д. - Очистите матрицу ДНК, удалите примеси белка или извлеките матричную ДНК с помощью наборов для очистки.

    ■ Денатурация шаблона не завершена —— Увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    ■ Ухудшение качества шаблона - повторно подготовьте шаблон.

    Праймер А-2

    ■ Низкое качество праймеров - повторно синтезируйте праймер.

    ■ Разрушение грунтовки —— Разбавьте праймеры с высокой концентрацией в небольшом объеме для консервации. Избегайте многократного замораживания и оттаивания или длительного криоконсервации при 4 ° C.

    ■ Неправильный дизайн праймеров (например, длина праймера недостаточная, димер образовался между праймерами и т. Д.) -Изменить дизайн праймеров (избегать образования димера праймера и вторичной структуры)

    А-3 мг2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 Температура отжига

    ■ Высокая температура отжига влияет на связывание праймера и шаблона. —— Уменьшите температуру отжига и оптимизируйте условия с градиентом 2 ° C.

    A-5 Время продления

    ■ Короткое время продления —— Увеличьте время продления.

    Q: ложноположительный

    Явления: отрицательные образцы также показывают полосы целевой последовательности.

    А-1 Загрязнение ПЦР

    ■ Перекрестное загрязнение целевой последовательности или продуктов амплификации - осторожно, не пипетируйте образец, содержащий целевую последовательность в отрицательном образце, и не проливайте их из центрифужной пробирки. Реагенты или оборудование следует автоклавировать для удаления существующих нуклеиновых кислот, а наличие загрязнения следует определять с помощью экспериментов с отрицательным контролем.

    ■ Загрязнение реагентов —— Смажьте реагенты и храните при низкой температуре.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрация слишком низкая —— Правильно увеличьте Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    ■ Неправильный дизайн праймера, и целевая последовательность гомологична нецелевой последовательности. —— Редизайн грунтовок.

    В: неспецифическое усиление

    Явления: Полосы ПЦР-амплификации не соответствуют ожидаемому размеру, большие или маленькие, или иногда встречаются как специфические полосы амплификации, так и неспецифические полосы амплификации.

    Праймер А-1

    ■ Низкая специфичность праймера.

    —— Редизайн грунтовки.

    ■ Слишком высокая концентрация праймера —— Надлежащим образом увеличьте температуру денатурации и увеличьте время денатурации.

    А-2 мг2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите концентрацию Mg2 +: Оптимизируйте содержание Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-3 Термостабильная полимераза

    ■ Избыточное количество фермента —— Уменьшите количество фермента соответствующим образом с интервалом 0,5 Ед.

    A-4 Температура отжига

    ■ Температура отжига слишком низкая —— Увеличьте температуру отжига или используйте метод двухэтапного отжига.

    Циклы ПЦР A-5

    ■ Слишком много циклов ПЦР —— Уменьшите количество циклов ПЦР.

    В: пятнистые или смазанные полосы

    Праймер А-1—— Низкая специфичность —— Измените дизайн праймера, измените положение и длину праймера, чтобы повысить его специфичность; или выполнить вложенную ПЦР.

    ДНК-матрица A-2

    —— Матрица не чистая —— Очистите матрицу или извлеките ДНК с помощью наборов для очистки.

    А-3 мг2+ концентрация

    ——Mg2+ концентрация слишком высока —— Правильно уменьшите Mg2+ концентрация: оптимизировать Mg2+ концентрация посредством серии реакций от 1 мМ до 3 мМ с интервалом 0,5 мМ для определения оптимального Mg2+ концентрация для каждой матрицы и праймера.

    A-4 dNTP

    —— Слишком высокая концентрация dNTP —— Уменьшите концентрацию dNTP соответствующим образом

    A-5 Температура отжига

    —— Слишком низкая температура отжига —— Увеличьте температуру отжига соответствующим образом

    Циклы A-6

    —— Слишком много циклов —— Оптимизируйте номер цикла

    В: Сколько ДНК-матрицы следует добавить в реакционную систему для ПЦР на 50 мкл?
    ytry
    В: Как усилить длинные фрагменты?

    Первый шаг - выбрать подходящую полимеразу. Обычная полимераза Taq не может быть проверена из-за отсутствия 3'-5'-экзонуклеазной активности, а несоответствие значительно снизит эффективность удлинения фрагментов. Следовательно, обычная полимераза Taq не может эффективно амплифицировать целевые фрагменты размером более 5 т.п.н. Полимераза Taq со специальной модификацией или другая высокоточная полимераза должна быть выбрана для повышения эффективности удлинения и удовлетворения потребностей амплификации длинных фрагментов. Кроме того, амплификация длинных фрагментов также требует соответствующей корректировки конструкции праймера, времени денатурации, времени удлинения, pH буфера и т. Д. Обычно праймеры с 18-24 п.н. могут привести к лучшему выходу. Чтобы предотвратить повреждение шаблона, время денатурации при 94 ° C следует сократить до 30 секунд или меньше за цикл, а время повышения температуры до 94 ° C перед амплификацией должно быть менее 1 мин. Более того, установка температуры удлинения около 68 ° C и проектирование времени удлинения в соответствии со скоростью 1 т.п.н. / мин может обеспечить эффективную амплификацию длинных фрагментов.

    В: Как повысить точность амплификации при ПЦР?

    Частоту ошибок при амплификации ПЦР можно снизить, используя различные ДНК-полимеразы с высокой точностью. Среди всех обнаруженных к настоящему времени ДНК-полимераз Taq фермент Pfu имеет самый низкий уровень ошибок и самую высокую точность (см. Прилагаемую таблицу). Помимо выбора ферментов, исследователи могут дополнительно снизить скорость мутаций ПЦР за счет оптимизации условий реакции, включая оптимизацию состава буфера, концентрацию термостабильной полимеразы и оптимизацию количества циклов ПЦР.

    Напишите здесь свое сообщение и отправьте его нам