Набор TGuide S96 для РНК крови / клеток / тканей

A-1 Недостаточный лизис или гомогенизация клеток

---- Уменьшите использование образца, увеличьте количество буфера для лизиса, увеличьте время гомогенизации и лизиса.

A-2 Слишком большое количество пробы

---- Уменьшите количество используемого образца или увеличьте количество буфера для лизиса.

A-1 Недостаточный лизис или гомогенизация клеток

---- Уменьшите использование образца, увеличьте количество буфера для лизиса, увеличьте время гомогенизации и лизиса.

A-2 Слишком большое количество пробы

---- Пожалуйста, обратитесь к максимальной мощности обработки.

РНК А-3 не полностью элюируется из колонки.

---- После добавления воды, свободной от РНКазы, оставьте ее на несколько минут перед центрифугированием.

A-4 Этанол в элюенте

---- После ополаскивания снова центрифугируйте и удалите как можно больше промывочного буфера.

A-5 Среда для культивирования клеток удалена не полностью

---- При сборе клеток старайтесь как можно больше удалить культуральную среду.

A-6 Клетки, хранящиеся в RNAstore, не центрифугируются эффективно.

---- Плотность хранения РНК больше, чем в средней среде для культивирования клеток; поэтому следует увеличить центробежную силу. Рекомендуется центрифугировать при 3000x g.

A-7 Низкое содержание и распространенность РНК в образце

---- Используйте положительную пробу, чтобы определить, вызвана ли низкая урожайность пробой.

A-1 Материал не свежий

---- Свежие ткани следует хранить в жидком азоте немедленно или сразу же помещать в реагент RNAstore, чтобы обеспечить эффект экстракции.

A-2 Слишком большое количество пробы

---- Уменьшите количество пробы.

Контаминация РНКазы А-3n

---- Хотя буфер, входящий в набор, не содержит РНКазу, он легко может загрязнить РНКазу во время процесса экстракции, и с ним следует обращаться осторожно.

A-4 Загрязнение электрофореза

---- Замените буфер для электрофореза и убедитесь, что расходные материалы и загрузочный буфер не загрязнены РНКазой.

A-5 Слишком большая нагрузка для электрофореза

---- Уменьшите количество загружаемых образцов, загрузка каждой лунки не должна превышать 2 мкг.

A-1 Количество пробы слишком велико

---- Уменьшите количество пробы.

A-2 Некоторые образцы имеют высокое содержание ДНК и могут быть обработаны ДНКазой.

---- Выполните обработку ДНКазой, свободной от РНКазы, для полученного раствора РНК, и РНК может быть непосредственно использована для последующих экспериментов после обработки или может быть дополнительно очищена с помощью наборов для очистки РНК.

Стеклянная посуда, запеченная при 150 ° C в течение 4 ч. Пластиковые контейнеры погружают в 0,5 М NaOH на 10 мин, затем тщательно промывают водой, свободной от РНКазы, и затем стерилизуют для полного удаления РНКазы. Реагенты или растворы, используемые в эксперименте, особенно вода, не должны содержать РНКазы. Для приготовления всех реагентов используйте воду, не содержащую РНКаз (налейте воду в чистую стеклянную бутыль, добавьте DEPC до конечной концентрации 0,1% (об. / Об.), Встряхните в течение ночи и автоклав).